SignalStar® mIHCパネルデザイン
始める前に
SignalStar Multiplex IHC技術は、特異的な一次抗体と蛍光検出試薬を用いて、FFPE組織サンプルの細胞タンパク質を標識します。高度に検証された抗体パネルを用いた空間生物学の実験用のこの技術により、複数の標的を同時に定量できます。
自動でパネルデザインを設計するSignalStar Multiplex IHCパネルビルダーを活用することにより、抗体と蛍光色素の正確な組み合わせを検討する時間を省略できます。実験デザインは、4つの基本的なステップで設計可能であり、標的の種や使用する抗体、組み合わせる蛍光色素、設定するイメージングラウンドを迅速かつ簡単に選択できます。または、種や抗体を選択した後、これら以外の選択項目についてはパネルビルダーが自動で設計したを提案に従うこともできます。
お手持ちのイメージング装置との適合性を確認
- SignalStar Multiplex IHCプロトコールは、手動で行うこともLeica Biosystems社のBOND RX全自動免疫染色装置を用いて自動で行うこともできます。詳細なイメージング装置の要件に関しては、プロトコールを参照してください。
- スペクトルの漏れ込みを回避して最高の結果を取得するためには、お手持ちの蛍光イメージング装置のスペクトル特性を考慮してください。
- 最終的なパネルに、DAPIの他に4種類の蛍光チャンネルが含まれる場合は、蛍光イメージング装置がこれらのチャンネルを特異的に検出し、以下のパラメーターに基づいて分離可能であることを確認する必要があります。
蛍光チャンネル | 励起波長 (nm) | 放射波長 (nm) | レーザー線 | 一般的なフィルターセット |
488 | 488 | 520 | 488 | FITC |
594 | 590 | 618 | 561/594 | Texas Red |
647 | 650 | 668 | 594/633 | Cy®5 |
750 | 752 | 776 | 633 | Cy®7 |
SignalStar Multiplex IHCパネルのデザイン方法
ステップ1：標的の種を選択する
SignalStar Multiplex IHCに用いる抗体は、表示されている種との特異的な交差性について検証済みです。すべての抗体が、すべての種で機能するわけではありません。
ステップ2：抗体を選択する
目的のマーカーに対する、検証済みの3-8種類の抗体を選択してください。SignalStarパネルでの使用が認められた抗体は、すべてのCST®抗体と同様に、アプリケーションごとに独立に検証されています。そのため、これらは期待通りに機能することが保証されており、お客様は信頼性と再現性の高い結果を取得できます。
標的がSignalStar標識抗体として表示されない場合、代わりにパネルビルダーで一次抗体を選択する際にSignalStar®二次抗体を追加して、未標識IHC検証済み抗体を使用することもできます。SignalStar二次抗体は、最初のイメージングラウンドでのみ使用可能であることに注意してください。
ステップ3：パネルビルダーの結果を確認または編集する
パネルビルダーは、抗体を様々な蛍光色素やイメージングラウンドと効率良く正確に組み合わせることができます。そのため、お客様はmIHCパネルを自動で設計できます。パネルビルダーの結果を確認してそのまま利用する、または編集を選択して実験デザインのさらなる調整を行うことができます。
ステップ4：注文を確認する
実験に必要なすべての抗体とバッファーキットが自動で買い物かごに追加されます。パネルビルダーで設計したパネルは、何回でも買い物かごに追加可能です。すでに買い物かごに入っているパネルを削除しないように注意してください。
SignalStar mIHCワークフロー
図1：SignalStar mIHCアッセイは、FFPE組織における最大8種類の標的の同時標識を可能にします。FFPE組織切片の脱パラフィン、再水和、抗原賦活化を行い (A)、希望のプレックスサイズ (3から最大8種類のオリゴ標識抗体) のすべての抗体を、1回の一次抗体インキュベーションステップの際に同時に添加します (B)。蛍光色素 (チャンネル：488、594、647、750) 標識済みの相補的なオリゴヌクレオチドを用いて構築したオリゴ-蛍光色素のコンストラクトを抗体に結合させて、1回目のイメージングラウンドで最大4種類のオリゴ標識抗体のシグナルを増幅させます (C-D)。プレックスサイズが4より大きい場合は、1回目のオリゴヌクレオチドと蛍光色素を穏やかに除去し (E)、2回目のイメージングラウンドで、最大4種類の追加のオリゴ標識抗体のシグナルを増幅させます (F)。その後、お手持ちのソフトウェアまたはオープンソースのソフトウェアを用いてコンピューター上で2つの画像を結合し、8プレックスの完全な画像を作成します (G)。
サポートが必要ですか？
CSTは、研究にSignalStar Multiplex IHCを導入できるように最適化するための専門家によるサポートを提供しています。
SignalStarに関するトラブルシューティング情報や技術的な質問に対する回答は、テクニカルサポートページをご覧ください。
Cell Signaling Technology、CST、SignalStarは、Cell Signaling Technology, Inc.の登録商標です。Cyは、GE Healthcareの登録商標です。その他すべての商標は、それぞれの所有者に帰属します。詳細は/legal/trademark-informationをご覧ください。
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