SignalStar® Multiplex IHCのよくある質問
SignalStar Multiplex IHCキットと試薬はどのように検証されていますか？
CSTは、SignalStar Multiplex IHCパネルビルダーでお選びいただける各抗体を厳密に検証しています。また、イメージングの両ラウンドにおいて、タイトレーションや蛍光色素との組み合わせを通じて、抗体の様々な条件を試験しています。試験は、様々な腫瘍や組織を用いて行います。また、従来の発色アッセイでも用いられるこれらの抗体は、この蛍光アッセイの基礎となるため、厳密に試験されています。すべてのマルチプレックス構成や組織をテストすることはできません。その他のご質問については、テクニカルサポートページをご覧ください。
このアッセイは凍結した組織で機能しますか？
SignalStar マルチプレックスIHC抗体、キット、試薬は、FFPE組織での使用について特別に設計され、厳密に検証されています。凍結組織での使用は検証されていません。
抗ヒト抗体はありますか？
SignalStar Multiplex IHCパネルビルダーの最初のステップで「Human」を選択すると、ヒト反応性メニューが表示されます。
抗マウス抗体はありますか？
SignalStar Multiplex IHCパネルビルダーの最初のステップで「Mouse」を選択すると、マウス反応性メニューが表示されます。
利用可能な抗体のリストに目的の標的が見当たりません。他の抗体をパネルに追加することができますか？
はい。標的がSignalStar標識抗体として表示されない場合、パネルビルダーで一次抗体を選択し、代わりにSignalStar二次抗体を追加して、未標識IHC検証抗体を使用できます。
SignalStar二次抗体は、最初のイメージングラウンドでのみ使用できます。
あるいは、SignalStarアッセイ後に同じ組織で直接免疫蛍光染色を実施することもできます。SignalStar®蛍光除去キット#32722では、抗体を剥がすことなく蛍光オリゴを除去し、組織を損傷せずに保持できます。その後、標識抗体で組織を染色し、直接免疫蛍光染色で可視化することができます。
このアッセイに用いる抗体と直接標識を組み合わせることはできますか？
SignalStar Multiplex IHCキットと試薬は、直接標識済み抗体と組み合わせての使用に対してはまだ検証されていません。SignalStar® Fluorescence Removal Kit #32722を使えば、SignalStar mIHCの後に蛍光シグナルを除去し、そのまま免疫蛍光染色を行うことができます。この方法で、強力な細胞表面マーカーに対する多くの直接標識抗体が機能することが分かっています。詳細は、ポスターをご覧ください。さらに、直接免疫蛍光染色イメージングに使用可能な、弊社の直接標識抗体の製品ラインナップもご覧ください。
SignalStar染色と発色染色を連続切片を用いて比較すると、SignalStar染色ではより多くの陽性細胞が見えます。この過剰な染色が正しいどうかを、どのように確認すれば良いですか？
最適化の過程で、蛍光染色は発色染色よりも高い陽性率を示す可能性があることが分かりました。過剰な染色が特異的であることを確認するには、細胞内局在や、他の染色との共局在性が正しいことを確認してください。例えば、すべてのCD8+細胞がCD3+である場合、発色染色と比較して過剰なCD8+染色は、高い可能性で正確です。
染色が完了してからスライドをイメージングするまで、スライドをどのぐらいの時間保存できますか？
1回目のイメージングラウンドは、染色完了後、最大8時間後までのイメージングにおいて強いシグナルを示すと考えられます。2回目のイメージングラウンドでは、イメージングは染色完了後に可能な限り速やかに行うべきですが、最大8時間後まではシグナルは強いと考えられます。
SignalStarキットと試薬は、使用を予定している組織に対して最適化する必要がありますか？
SignalStar Multiplex IHCのキットと試薬は、蛍光色素の組み合わせと抗体の染色順について最適化されています。標的の特性と発現レベルは組織によって異なるため、パネル内の抗体濃度を2倍に増やす、または0.5倍に減らすなどの調整を行うことにより、実験で最適なシグナルを取得できます。
このアッセイに含むべき適切なポジティブコントロールは何ですか？ 複数のコントロールが必要ですか？
各マーカーについて、発色IHCで陽性であることことが示されたあらゆる組織が、ポジティブコントロール組織として機能します。標的ごとにポジティブコントロールが必要であるため、複数のコントロールが必要になる場合もあります。最適な比較を行うために、可能な限り連続切片に近いものを使用してください。
このSignalStarプロトコールに記載されている方法以外の抗原賦活化を行うことはできますか？
最適な結果を得るためには、SignalStarのプロトコールから逸脱することはお勧めできません。しかし、プロトコールに詳述されている抗原賦活化方法を使えない場合は、蛍光シグナルが減少しますが、電子レンジを使用してみても良いかもしれません。存在量が低いマーカーを検出する場合は、電子レンジの使用はお勧めできません。この代替法では結果の保証はできません。
電子レンジを使用した抗原賦活化を行うには：
- 250 mLの1X EDTA賦活化溶液を調製する場合は、25 mLのSignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X) (#14747) を225 mLのdH2Oで希釈してください。
- スライドを1X EDTA賦活化溶液の容器に浸し、沸騰するまで電子レンジで加熱し、沸騰状態を維持します (最大出力で5分間)。
- 煮沸直前の温度 (95 - 98°C) で15分間加熱します。ほとんどの電子レンジでは、これはパワーレベル3で8分間、パワーレベル2で7分間ということになります。
- スライドの容器を電子レンジから取り出して、dH2Oの蛇口の下に置きます。すべてのEDTAがdH2Oに置換されるまで、スライド容器に直接水を5分間加えます。その後の冷却は必要ありません。
テクニカルサポート
SignalStarに関するトラブルシューティング情報や技術的な質問に対する回答は、テクニカルサポートページをご覧ください。
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U.S. Patent No. 10,781,477, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.