SignalStar™ Multiplex IHCのトラブルシューティングガイド

試薬に問題がないことを確認するために、コントロールスライドを使用してください。

組織に目的のバイオマーカーが発現していることを確認するために発色染色を行ってください。

488、594、647、750 nmのチャンネルの可視化に、正しいフィルターセットが使用されていることを確認してください。

プロトコールに記載されている蛍光チャンネルの詳細を参照してください。

Texas Redのフィルターセットが594 nmチャンネルの可視化に使用されていることを確認してください。TRITCフィルターは互換性がありません。

弊社の最適化の過程では、様々なタイプの腫瘍や組織を利用していますが、すべての組織で検証を行ったわけではありません。自家蛍光が高い組織やすぐに固定を行わなかった組織などでは、どのアッセイ法であっても染色が困難な場合があります。オリゴ標識抗体のタイトレーションを行うことにより、シグナルを強めたり弱めたりできる場合があります。さらに、TrueBlack Liposfuscinのような自家蛍光を減少させることを目的とした試薬を使用することもできます。

パネルデザイン時に自家蛍光を考慮し、発現が低いバイオマーカーではなく、発現が高い表現型マーカーを488 nmチャンネルに配置してください。

488、594、647、750 nmのチャンネルの可視化に、正しいフィルターセットが使用されていることを確認してください。プロトコールに記載されている蛍光チャンネルの詳細を参照してください。Texas Redのフィルターセットが594 nmチャンネルの可視化に使用されていることを確認してください。TRITCフィルターは互換性がありません。

お手持ちのイメージング装置の特性がこれらの蛍光チャンネルを分離するのに理想的でない場合は、スペクトルライブラリーを使用して蛍光シグナルをコンピューター上で分離することができます。

594 nmチャンネルでのバイオマーカーの発現がなく、このチャンネルにシグナルがほとんどない、または全くないことが原因である可能性があります。

または、647 nmチャンネルでの発現が高く、594 nmチャンネルへのシグナルのスペクトルの漏れ込みが生じた可能性があります。

この場合、594チャンネルの弱い特異的なシグナルが、この現象によりかき消される可能性があります。

647 nmチャンネルに添加する抗体の量を減らすことにより、このシグナルの漏れ込みを解決できる可能性があります。

シグナルが強い表現型マーカーと発現レベルがより低いマーカーのスペクトルを分離できるように、パネルを設計する際にスペクトルの漏れ込みを考慮してください。

空のコンテナに、SignalStar試薬を充填しすぎないでください。容器を再度スキャンした際に「Empty」と表示されていたら、「Mark not empty」をクリックし、「Refill」をクリックします。適量の試薬が添加されていることを確認してください。

BOND RXプロトコールに記載の通り、一部の試薬は複数のコンテナを必要とします。

機器のプロバイダーに、追加の情報とサポートについて問い合わせてください。