SignalStar^® Multiplex IHC抗体と蛍光色素のペアリングにおける考慮事項

SignalStar Multiplex IHCパネルビルダーは、パネルを自動設計し、抗体を蛍光色素とペアリングし、またイメージングラウンドを効率的な精度で行います。パネルビルダーの結果は編集することができ、設計を思いのままに行うことができます。パネルを変更する場合は、以下の点に注意してください：

タンパク質の存在：チャンネル594と647が最も明るいため、最も存在量の低い抗原を結合する抗体とペアリングします。チャンネル750は、シグナルの強度がより低く、パネルビルダーは一部の抗体のチャンネル750とのペアリングを許容しません。

自家蛍光：組織内の存在量の低いタンパク質を検出すると予想される抗体は、自家蛍光の影響が少ないチャンネルにある必要があります。チャンネル488は、自家蛍光の影響が最も大きいため、これらのマーカーでは避けるべきです。

イメージングラウンド: 抗体の大部分はイメージングラウンドに関係なく強力でクリーンである必要がありますが、シグナル強度は標的発現レベルの低さや組織の質不良によって影響を受ける可能性があります。最良の結果を得るには、存在量の少ないタンパク質に対する抗体を最初のイメージングラウンドに置き、存在量の多いマーカーに対する抗体を2回目のイメージングラウンドに置きます。パネルビルダーは、一部の抗体の特定のイメージングラウンドでの使用を許容しない場合があります。

イメージング機器：スペクトルの漏れ込みを回避するには、蛍光顕微鏡のスペクトル特性を考慮してください。落射蛍光顕微鏡、共焦点蛍光顕微鏡、および走査型蛍光顕微鏡は通常、以下のSignalStarチャンネルを区別できます。

最終的なパネルにDAPIの他に4つの蛍光チャンネルが含まれる場合は、蛍光イメージング装置がこのチャンネルを特異的に検出し、このパラメーターに基づいて分離可能なことを確認する必要があります。

スペクトルの分離：SignalStar Multiplex IHCパネルに含まれる抗体、試薬、およびプロトコールは、スペクトルの重複を最小限に抑えるために最適化されています。個々の抗体からの蛍光をさらに確実に区別できるようにするには、上記のチャンネルで個別に染色したスライドを使用してスペクトルライブラリーを作成することが推奨されます。

お持ちのイメージング装置の特性がこの蛍光チャンネルを分離するのに理想的でない場合は、スペクトルライブラリを使用して蛍光シグナルを計算して混合解除することができます。

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U.S. Patent No. 10,781,477, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.