ChIP-qPCR検証済み抗体
エピジェネティクスの多様なプロセスがタンパク質-DNA相互作用を介して制御されています。このような相互作用を研究する場合、これら相互作用がいつ、ゲノムのどこで起こるかを解析する信頼性の高い手法が必要になります。ChIPは、特定の遺伝子や制御領域とタンパク質の相互作用を解析する手法として広く利用されています。ChIPを定量的PCR (qPCR) と組み合わせることで、生細胞内でリアルタイムに起こるタンパク質-DNA相互作用を定量的に解析することができます。これは比較的短時間で実施が可能な、強力な研究ツールとなります。
ChIP-qPCR実験を成功させるには、感度と特異性が高く、再現性の高い結果が得られる抗体を用いることが重要です。CSTのChIP-qPCR検証済み抗体は、信頼性の高いデータを得られるように厳格な検証が実施されています。
ChIP-qPCR抗体検証ステップ
- 抗体の特異性の試験として、ChIPによって少なくとも2箇所の既知結合遺伝子領域が濃縮されること、1箇所の非結合領域の濃縮が起こらないことを確認しています。既知の非結合領域の濃縮は、既知結合領域に比較して最小限でなければなりません。
- CST独自のヒストンペプチドアレイを使用して、ヒストンメチルリジンとメチルアルギニンとの親和性を検討し、抗体の特異性をさらに確認します。
- 抗体の感度の試験として、ChIPによる既知の結合領域の濃縮をアイソタイプコントロールを用いた場合と比較してS/N比を算出しています。既知結合領域の濃縮率のS/N比が、規定の最小値を上回ることを確認しています。
- それぞれの抗体で最適量の検討を行い、ChIPアッセイで最適な性能を示す濃度を決定しています。ChIPによる標的遺伝子領域の濃縮は、抗体量が多すぎても少なすぎても悪影響がみられます。
- 新ロット製品は、旧ロット製品と対比しながら最適量を試験し、ロット間での再現性を確認しています。
- 抗体の特異性は、既知のポジティブ細胞とネガティブ細胞の比較、野生型細胞とノックアウト細胞の比較で評価しています。
- 抗体の特異性は、核移行や標的遺伝子への結合を誘導する細胞処理を利用して評価しています。
- 抗体の性能は、お客様に安心してご利用いただけるよう、ChIPのほかにも複数のアプリケーションで試験しています。