Render Target: STATIC
Render Timestamp:
6/5/2026, 5:21:58 AM EDT
6/5/2026, 9:21:58 AM UTC
Commit: a854f3e2d877b833e27badd637de63a8a4794b83
Cell Signaling Technologyロゴ - Extra Large
注目情報を見る >>
1% for the planet logo
  1. ホーム /
  2. 学術情報 & サポート /
  3. プロトコール /
  4. 免疫組織化学染色プロトコール (パラフィン切片) - SignalStain® Boost Detection Reagent

免疫組織化学染色プロトコール (パラフィン切片) - SignalStain® Boost Detection Reagent

重要： 製品がパラフィン包埋組織切片 (IHC-P) で検証され使用が承認されているかどうかについては、 製品データシートの上部にあるApplicationsのセクション、 あるいは製品ウェブページで確認してください。

注意：適切な抗体希釈率や希釈液、抗原賦活化液を、 製品ごとのプロトコールで確認してください。

A. 溶液および試薬

注意：溶液は、逆浸透脱イオン (RODI) 水、または 同等の精製水で調製してください。

  1. キシレン
  2. エタノール (無水変性、病理学グレード、100%および95%)
  3. 脱イオン水 (dH2O)
  4. 洗浄バッファー：
    1. 1X Tris Buffered Saline with Tween 20 (TBST)： 1X TBST 1 Lを調製する場合は、10X Tris Buffered Saline with Tween 20 (TBST) (#9997) 100 mLをdH2O 900 mLに加えて混合してください。
  5. 抗体希釈液：
    1. SignalStain® Antibody Diluent：(#8112)
    2. 5% Normal Goat Serum含有TBST：1X TBST 5 mLにNormal Goat Serum (#5425) 250 µLを加えてください。
    3. 5%Normal Goat Serum含有PBST：1X PBST 5 mLにNormal Goat Serum (#5425) 250 µLを加えてください。
      • 1X PBST：1X PBST 1 Lを調製する場合は、20X Phosphate Buffered Saline with Tween 20 (PBST) (#9809) 50 mLをdH2O 950 mLに加え、混合してください。
    4. 1X Phosphate Buffered Saline with Tween 20 (PBST) 抗体 希釈液：1X PBST 5 mLを調製する場合は、Phosphate Buffered Saline with Tween 20 (PBST-20X) (#9809) 250 μLをdH2O 5 mLで希釈してください。
  6. 抗原賦活化液：
    1. 1X クエン酸賦活化液：1X クエン酸賦活化液250 mLを調製する場合は、SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 25 mLをdH2O 225 mLで希釈してください。
    2. 1X EDTA賦活化液：1X EDTA 賦活化液 250 mLを調製する場合は、SignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X) (#14747) 25 mLをdH2O 225 mLで希釈してください。
    3. TE (10 mM Tris/1 mM EDTA, pH 9.0)：1 Lを調製する場合は、 Tris base (C4H11NO3) 1.21 gおよびEDTA (C10H14N2O8Na2•2H2O) 0.372 gを dH2O 950 mLに加えてください。pHを9.0に調整して、dH2Oで全量を1 Lにしてください。
    4. ペプシン：1 mg/mLとなるようにTris-HCl溶解し、pH 2.0に調整してください。
  7. 3%過酸化水素：100 mLを調製する場合は、30% H2O2 10 mLをdH2O 90 mLに加えてください。
  8. ブロッキング液：1X TBST/5% Normal Goat Serumまたは1X Animal-Free Blocking Solution
    1. 1X TBST/5% Normal Goat Serum：Normal Goat Serum (#5425) 250 µLを、1X TBST 5 mLに加えてください。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019) 1 mL をdH2O 4 mLに加えてください。
  9. 検出システム：SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse #8125、HRP, Rabbit #8114、HRP, Rat #72838、HRP, Goat #63707、AP, Mouse #31926、AP, Rabbit #18653、AP, Rat #15764、AP, Goat #26927)
  10. 基質：HRP標識用：SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)、SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit (#96632)、 SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit (#72986)、SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit (#69644)、AP標識用：SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit (#76713)、 SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit (#12824)
  11. ​ヘマトキシリン：Hematoxylin (#14166)
  12. 封入剤：SignalStain® Mounting Medium II (#84583)、SignalStain® Aqueous Mounting Medium (#27290)

B. 脱パラフィン/再水和

注意：操作の間は、スライドを乾燥させないように注意してください。

  1. 切片の脱パラフィン/水和：
    1. 切片をキシレンに浸し、5分間インキュベートして洗浄してください。3回繰り返してください。
    2. 切片を100%エタノールに浸し、10分間インキュベートして洗浄してください。2回繰り返してください。
    3. 切片を95%エタノールに浸し、10分間インキュベートして洗浄してください。2回繰り返してください。
  2. 切片をdH2Oに浸し、5分間インキュベートして洗浄してください。2回繰り返してください。

C. 抗原賦活化

注意：推奨される抗原賦活化液やプロトコールは製品により異なるので、 製品ごとのプロトコールを確認してください。

  1. クエン酸の場合：スライドを1X クエン酸賦活化液に入れ、 電子レンジで沸騰直前まで加熱してください。 その後、沸騰直前の温度 (95-98°C) を10分間維持してください。スライドを実験台で30分間冷却してください。
  2. EDTAの場合：スライドを1X EDTA賦活化液に入れ、 電子レンジで沸騰直前まで加熱してください。 その後、沸騰直前の温度 (95-98°C) で15分間維持してください。その後の冷却は必要ありません。
  3. TEの場合：スライドを 10 mM　Tris/1 mM EDTA (pH 9.0) に入れ、電子レンジで沸騰直前まで加熱してください。その後、 沸騰直前の温度 (95-98°C) で18分間維持してください。スライドを実験台で30分間冷却してください。
  4. ペプシンの場合：37°Cで10分間切片を処理してください。

D. 染色

注意：推奨の抗体 希釈液は、製品ごとのプロトコールを確認してください。

  1. dH2Oで切片を各5分間、3回洗浄してください。
  2. 3%過酸化水素で切片を10分間インキュベートしてください。
  3. dH2Oで切片を各5分間、2回洗浄してください。
  4. 洗浄バッファーで切片を5分間洗浄してください。
  5. 推奨ブロッキング液100-400 µLで各切片を室温で1 時間ブロッキングしてください。
  6. ブロッキング液を除去し、推奨抗体希釈液で希釈した 一次抗体100-400 µLを各切片に加えてください。
  7. 4°Cで一晩インキュベートしてください。
  8. SignalStain® Boost Detection Reagentを 室温に戻してください。
  9. 抗体液を除去し、洗浄バッファーで切片を 各5分間、3回洗浄してください。
  10. 切片を覆うようにSignalStain® Boost Detection Reagentを滴下 (1-3滴) してください。加湿チャンバー内で、室 温で30分間インキュベートしてください。
  11. 洗浄バッファーで切片を各5分間、3回洗浄してください。
  12. 製品使用情報に従って、基質を調製してください。
  13. スライドに100-400 µLの基質を添加してください。反応を注意深く観察してください。推奨 反応時間は使用する基質によって異なります。 詳細については製品使用情報を参照してください。
  14. dH2Oにスライドを浸してください。
  15. 必要に応じて、使用説明書に従い切片をHematoxylin (#14166) で対比染色してください。
  16. dH2Oで切片を各5分間、2回洗浄してください。
  17. 切片を脱水してください：
    1. 95%エタノールで切片を各10秒間、2回インキュベートしてください。
    2. 100%エタノールで切片を各 10秒間、2回インキュベートしてください。
    3. キシレンで切片を各10秒間、2回インキュベートしてください。
  18. カバーガラスと封入剤で切片を封入してください。

作成日：2025年8月