凍結組織用免疫蛍光染色プロトコール (IF-F)

重要：製品ウェブページまたは製品データシートのProduct Usageのセクションで、お使いになる製品が凍結組織切片 (IF-F) で検証済みかつ承認済みあることを確認してください。

より高品質な免疫蛍光染色画像を得るために、効率的で費用対効果の高い弊社のImmunofluorescence Application Solutions Kit #12727を使用してください。

注意：溶液は、逆浸透脱イオン (RODI) 水、または同等の精製水で調製してください。

1X Phosphate Buffered Saline (PBS)：1X PBSを1 L調製する場合は、 10X Wash Buffer、Phosphate Buffered Saline #12528 100 mLをdH₂O 900 mLに加えて混合し、pHを 8.0に調整してください。
4% Formaldehyde, Methanol-Free #47746：新しいものを使用してください。
ブロッキングバッファー：すぐに使用可能なImmunofluorescence Blocking Buffer #12411を購入するか、二次抗体の宿主種と同じ生物種の正常血清0.5 mL (例：Normal Goat Serum #5425) とTriton X-100 30 µLを1X PBS 9.5 mLに加え、1X PBS/5%正常血清/0.3% Triton X-100バッファーを調製してください。4°Cで保存してください。
抗体希釈バッファー：すぐに使用可能な Immunofluorescence Antibody Dilution Buffer #12378を購入するか、BSA #9998 0.1 gとTriton X-100 30 µLを1X PBS 10 mLに加え、1X PBS/1% BSA/ 0.3% Triton X-100バッファーを調製してください。4°Cで保存してください。
蛍光標識二次抗体：使用する一次抗体の宿主種 (例：ラビット) に対応した二次抗体を選択してください。免疫蛍光染色検証済み二次抗体の一覧は、こちらをご覧ください。
封入剤：Prolong Gold AntiFade Reagent #9071またはProlong Gold AntiFade Reagent with DAPI #8961を使用してください。
オプションの溶液

重要

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1X クエン酸賦活化液：1X クエン酸賦活化液250 mLを調製する場合は、SignalStain^® Citrate Unmasking Solution (10X) #14746 25 mLをdH₂O 225 mLで希釈してください。
100% Methanol #13604：使用前に氷冷してください。

固定：1X PBSで4%に希釈した高品質なホルムアルデヒドを用いて固定し、組織抗原を保存してください。新しい固定液を使用し、未使用の固定液は適切に廃棄してください。最良の結果を得るために、承認済みのプロトコールに従って動物を灌流してください。
1. 新鮮凍結サンプルの場合は、組織を6-20 µmの範囲で切片化し、正電荷スライドに付着させて室温で15分間固定してください。
メタノールによる透過化 (オプション)：氷冷した 100%メタノールで組織切片を覆い、-20°Cまたは氷上で10分間インキュベートしてください。切片を乾燥させないでください。
抗原賦活化 (オプション)：スライドを1X クエン酸賦活化液に浸して電子レンジで沸騰直前まで加熱し、約70°Cで20 分間維持してください。その後、スライドを卓上で 30分間冷却してください。

注意：この手順の間は、常にサンプルを乾燥させないようにし、蛍光色素は光に弱いため遮光して保護してください。

注意：蛍光標識一次抗体を使用する場合は、ステップ9に進んでください。

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

作成日：2025年8月