細胞ベースのイメージング用免疫蛍光染色プロトコール (免疫細胞化学染色)

重要：製品ウェブページまたは製品データーシートの Product Usageのセクションで、お使いになる製品が培養細胞株 (IF-IC) で検証済みであることを確認してください。

より高品質な免疫蛍光染色画像を得るために、効率的で費用対効果の高い弊社のImmunofluorescence Application Solutions Kit #12727を使用してください。

注意：溶液は、逆浸透脱イオン (RODI) 水、または同等の精製水で調製してください。

1X Phosphate Buffered Saline (PBS)：1X PBSを1 L調製する場合は、 10X Wash Buffer、Phosphate Buffered Saline #12528 100 mLをdH₂O 900 mLに加えて混合し、 pHを8.0に調整してください。
製品専用試薬
1. 4% Formaldehyde, Methanol-Free #47746：新しいものを使用してください。
2. 100% Methanol #13604：使用前に氷冷してください。
ブロッキングバッファー：すぐに使用可能なImmunofluorescence Blocking Buffer #12411を購入するか、二次抗体の宿主種と同じ生物種の正常血清0.5 mL (例：Normal Goat Serum #5425) とTriton X-100 30 µLを1X PBS 9.5 mLに加え、1X PBS/5%正常血清/0.3% Triton X-100バッファーを調製してください。4°Cで保存してください。
抗体希釈バッファー：すぐに使用可能な Immunofluorescence Antibody Dilution Buffer #12378を購入するか、BSA #9998 0.1 gとTriton X-100 30 µLを1X PBS 10 mLに加え、1X PBS/1% BSA/ 0.3% Triton X-100バッファーを調製してください。4°Cで保存してください。
蛍光標識二次抗体：使用する一次抗体の宿主種 (例：ラビット) に対応した二次抗体を選択してください。免疫蛍光染色検証済み二次抗体の一覧は、こちらをご覧ください。
封入剤：Prolong Gold AntiFade Reagent #9071またはProlong Gold AntiFade Reagent with DAPI #8961を使用してください。

重要：最適な結果を得るには、各CST^®®抗体に最適なサンプル調製ステップを実施する必要があります。製品ウェブページでプロトコールを参照し、詳細な推奨事項を確認してください。

固定
- ホルムアルデヒド固定：細胞を室温で15 分間、4%ホルムアルデヒドで固定してください。
- メタノール固定：氷冷した100%メタノールを穏やかに滴下して細胞を覆い、–20°または氷上で15分間インキュベートしてください。サンプルを乾燥させないでください。
洗浄固定液を吸引除去し、1X PBSで各5 分間、3回洗浄してください。
透過化 (ホルムアルデヒド固定後)
- Triton X-100による透過化：セクションCのステップ1に進んでください。
- メタノールによる透過化：氷冷した100% メタノールで細胞を覆い、–20°Cまたは氷上で10分間インキュベートしてください。メタノールを吸引除去し、 1X PBSで各5分間、3回洗浄してください。サンプルを乾燥させないでください。

注意：蛍光標識一次抗体を使用する場合は、ステップ8に進んでください。

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

作成日：2025年9月