フローサイトメトリー (生細胞染色プロトコール)

注意：溶液は、逆浸透脱イオン (RODI) 水、または同等の精製水で調製してください。

1X Phosphate Buffered Saline (PBS)：1X PBSを1 L調製するには、10X PBS #12528 100 mLを精製水 900 mLに加えてください。よく混合してください。
Antibody Dilution Buffer：すぐに使用可能なFlow Cytometry Antibody Dilution Buffer #9998 (1X PBS 100 mL) を購入してください。4°Cで保存してください。
推奨二次抗体：未標識抗体の検出用に、使用する一次抗体の宿主種 (例：ラビット) に対応した二次抗体を選択してください。フローサイトメトリー検証済み二次抗体の最新製品リストはこちらをご覧ください。

注意：蛍光細胞染色色素 (生死判定色素、DNA色素など) を使用する場合は、各色素の製品ページの推奨プロトコールを参照してください。フローサイトメトリーでの使用が検証された、細胞染色色素の製品リストをご覧ください。

注意：細胞数を血球計算盤かその他の方法で計測してください。

注意：全血を用いる場合は、免疫染色の前に赤血球を溶解し、遠心分離して洗浄してください。

注意：Fc受容体へのオフターゲット結合を防ぐために、免疫染色の前に生細胞をFc blocking bufferでプレインキュベートしてください。

注意：遠心分離の最適条件は、細胞のタイプと試薬の容量によって異なります。通常、150-300 gで1-5分間遠心すれば、細胞を沈殿させるのに十分です。

必要な細胞数をチューブまたはウェルに分注してください。(通常は、1アッセイあたり5 x 10⁵-1 x 10⁶ 細胞です)。
遠心分離で細胞を沈殿させて、上清を除去してください。
細胞を、 Antibody Dilution Bufferで推奨希釈率またはタイトレーションにより決定した希釈率に調製した一次抗体希釈液100 µLで再懸濁してください。
氷上で30分間から1時間インキュベートしてください。遮光してください。
Antibody Dilution Bufferまたは1X PBSに懸濁した細胞を遠心分離して洗浄してください。上清を捨ててください。もう一度、このステップを行ってください。直接標識抗体を用いる場合は、ステップ 9に進んでください。
細胞を、Antibody Dilution Bufferで推奨希釈率に調製した蛍光標識二次抗体100 µLで再懸濁してください。
氷上で30分間インキュベートしてください。遮光してください。
Antibody Dilution Bufferまたは1X PBSに懸濁した細胞を遠心分離して洗浄してください。上清を捨ててください。もう一度、このステップを行ってください。
細胞をAntibody Dilution Buffer 200-500 µLで再懸濁し、フローサイトメーターで解析してください。

_{For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.}